組織研磨機對提取動(dòng)物關(guān)節軟骨組織總RNA
實(shí)驗目的
研磨破碎軟骨組織(大鼠膝關(guān)節軟骨),提取其總RNA。
實(shí)驗原理
充分磨碎軟骨樣品(大鼠膝關(guān)節軟骨),再用相關(guān)試劑提取其總RNA。
實(shí)驗材料和器具
樣品:大鼠膝關(guān)節軟骨
儀器:多樣品組織研磨儀(上海凈信,Tissuelyser-24)
耗材:研磨罐(上海凈信,1研磨單位),研磨珠(上海凈信,8號研磨珠,1顆)
試劑:液氮若干
實(shí)驗步驟
1.研磨軟骨組織
1.1 取適量大鼠膝關(guān)節軟骨組織,剪切成約1立方厘米小塊;
1.2 將小塊軟骨組織置于液氮中2分鐘或放入-80度冰箱冷凍30分鐘;
1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐中,蓋好蓋子;
1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管,放入已經(jīng)在-20度冰箱預冷好的適配器中,加入變性液,β-巰基乙醇;
1.5 將適配器放入凈信研磨儀中,在14單位頻振條件下,研磨1min,可得到勻漿狀的軟骨組織;
2.總RNA提取
2.1 冰水浴下,加酸性水飽和酚,搖勻,加醋酸鈉,氯f(wàn)ang、異戊醇混合液,冰水浴上15min;
2.2 4℃下,離心,取上清液,加氯f(wàn)ang、異戊醇混合液,離心取上清,加異丙醇,-20℃下沉淀,離心,得到凝膠狀RNA和蛋白多糖混合沉淀,加無(wú)RNA酶水,溶解得膠狀溶液;
2.3 取膠狀溶液用plant RNAout試劑盒的RNA提取步驟得到總RNA沉淀,取沉淀,乙醇洗滌后用無(wú)RNA酶水溶解沉淀,即得關(guān)節軟骨組織總RNA溶液。
實(shí)驗結果
采用本實(shí)驗方法提取的動(dòng)物關(guān)節軟骨組織總RNA的收率高,并且純度高、質(zhì)量、完整性好,可以滿(mǎn)足分子生物學(xué)研究應用。
總RNA甲醛變性膠電泳結果
Ⅱ型膠原PCR擴增產(chǎn)物電泳結果
參考文獻:
[1]劉玉剛等,一種富含多糖的關(guān)節軟骨組織總RNA提取方法初探,第三軍醫大學(xué)學(xué)報:2009年24期。